+7 (495) 135-43-15
Рабочий день с 9:00 до 18:00
Российская ФедерацияМетодические рекомендации Минздрава СССР

Методические рекомендации по определению формальдегида в биосредах

установить закладку
установить закладку

     МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ФОРМАЛЬДЕГИДА В БИОСРЕДАХ*

_______________

* Утверждено Заместителем Главного Государственного санитарного врача СССР В.Е.Ковшило 20 января 1982 г. N 2715-82

Настоящие методические рекомендации предназначены для определения формальдегида в крови и в моче. Методики апробированы на различном контингенте населения.

Формальдегид - . бесцветный газ. Т.пл. - 92 °С, Т.кип. - 21 °С. Он хорошо растворим в воде, этиловом спирте, эфире и других растворителях.

Формальдегид обладает мутагенным, канцерогенным и токсичным эффектом на теплокровных животных и человека.

Данные методические рекомендации являются модификацией методических рекомендаций по определению формальдегида в водных вытяжках и модельных средах.

     

     ПРИНЦИП МЕТОДА

Метод основан на взаимодействии формальдегида с димедоном, экстракции продукта взаимодействия (формальдимедона) органическим растворителем из водного дистиллата, полученного после соответствующей обработки крови и мочи, последующем хроматографировании его на пластинках "Silufol" или силикагель-крахмал.

Открываемый минимум на пластинке - 0,05 мкг формальдегида.

Чувствительность: в крови - 0,25 мкг/мл, в моче - 0,6 мкг/мл (учитывая естественный фон формальдегида в этих средах, который может колебаться в значительных пределах).

Зависимость "окраска и размер пятен" наблюдается в интервале 0,05-1,0 мкг формальдегида в пробе, что соответствует 0,5-10 мкг формальдимедона на пластинке.

Схема реакции получения формальдимедона     


     РЕАКТИВЫ И РАСТВОРЫ

1. Хлороформ х.ч. ГОСТ 20015-74*

_______________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 20015-88. - Примечание изготовителя базы данных.

2. Димедон ГОСТ 6622-73*

______________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действуют ТУ 6-09-4690-78, являющиеся авторской разработкой. За дополнительной информацией обратитесь по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.

3. Стандартный раствор димедона в спирте 200 мкг/мл

4. Стандартный раствор формальдимедона в хлороформе 100 мкг/мл

5. 0,1% раствор гепарина в 0,85% растворе NaCl

6. 5% раствор трихлоруксусной кислоты в воде

7. Дистиллированная вода

8. Проявляющий раствор: 0,5% раствор йода в хлороформе

9. Натрий сернокислый безводный ч.д.а. ГОСТ 4166-66*

_______________

     * На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 4166-76. - Примечание изготовителя базы данных.

10. Спирт этиловый ректификат ГОСТ 5962-67*

_______________

     * На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 51652-2000. - Примечание изготовителя базы данных.

     

     ПОЛУЧЕНИЕ ФОРМАДИМЕДОНА

К 10 мл 30%-ного водного раствора формальдегида (0,1 г/моля) при перемешивании прибавляют 100 мл спиртового раствора димедона (31 г - 0,22 г/моля димедона в 100 мл этилового спирта). Полученную смесь нагревают на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 35-40 минут. Нагревание убирают и оставляют охлаждаться на воздухе до 20-25 °С. Выпавший осадок формальдимедона отфильтровывают на воронке Бюхнера, или на воронке с пористым фильтром, промывают дистиллированной водой (2 раза по 10 мл) и сушат на воздухе в чашке Петри.

С целью получения дополнительного количества формальдимедона следует упарить спиртовый фильтрат до начала выпадения кристаллического осадка, охладить до комнатной температуры и отфильтровать выпавшие кристаллы формальдимедона.

Полученный осадок формальдимедона перекристаллизовывают. Для этого в коническую колбочку помещают 10-15 мл диметилформамида, нагревают до 100 °С и постепенно прибавляют осадок формальдимедона. Полученную смесь нагревают до кипения. При наличии нерастворившегося осадка прибавляют несколько миллилитров диметилформамида до полного растворения осадка. Полученный раствор охлаждают на воздухе до 20-25 °С. Выпавший осадок формальдимедона отсасывают на воронке Бюхнера и промывают этиловым спиртом 2 раза по 5 мл. Осадок сушат на воздухе до постоянного веса.

Т.пл. - 184-186 °С. При отсутствии диметилформамида осадок формальдимедона можно перекристаллизовать из этилового спирта.

     

     ОБОРУДОВАНИЕ И ПОСУДА

1. Пластинки для хроматографии:

а) "СИЛУФОЛ" и "СИЛУФОЛ ИV - 254";

б) силикагель-крахмал (40 г тщательно растертого и просеянного силикагеля и 1 г крахмала смешивают с 125 г дистиллированной водой. Смесь растирают до получения сметанообразной массы и равномерно наносят на сухую поверхность пластинок для хроматографирования. Из указанной выше сорбционной массы может быть приготовлено 10-15 пластинок)

2. Весы аналитические ВЛА-200-М

3. Колбы мерные емкостью 25 мл ГОСТ 1670-64*

________________

* Вероятно ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ 1770-64. На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 1770-74. - Примечание изготовителя базы данных.

4. Воронки химические  60 мм ГОСТ 8613-64*

_______________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 25336-82, здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.

5. Делительные воронки на 10 мл ГОСТ 8613-64

6. Градуированные пипетки с ценой деления 0,01 мл и емкостью 0,1 мл ГОСТ 1770-64*

________________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 1770-74. - Примечание изготовителя базы данных.

           

7. Камера для хроматографирования (цилиндрический сосуд диаметром 15 см высотой 20 см с притертой крышкой ГОСТ 10565-75*)

________________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действуют ГОСТ 25336-82, ГОСТ 23932-90. - Примечание изготовителя базы данных.

8. Пульверизаторы стеклянные (см. "Химический анализ микроколичеств ядохимикатов" М.А.Клисенко, Т.А.Лебедева, З.Ф.Юркова стр.291, рис.24, Изд. Медицина, М., 1972)

9. Камера для опрыскивания пластинок (стеклянный колпак диаметром 20 см, высотой 25 см) ТУ 25-11-1022-75*

________________

* ТУ, упомянутые здесь и далее по тексту, являются авторской разработкой. За дополнительной информацией обратитесь по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.

           

10. Холодильник Либиха ГОСТ 9499-70

11. Бани водяные ТУ 64-1-2850-76

12. Мерные цилиндры на 10 и 25 мл ГОСТ 1770-74

13. Круглодонные или конические колбы на 10 мл на шлифах ГОСТ 1039-63*

_______________

* Вероятно ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ 10394-63. На территории Российской Федерации документ не действует. Действуют ГОСТ 25336-82, ГОСТ 23932-90. - Примечание изготовителя базы данных.

          

14. Колбы конические грушевидные для упаривания растворителя на 25 мл ГОСТ 10394-72*

_______________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действуют ГОСТ 25336-82, ГОСТ 23932-90. - Примечание изготовителя базы данных.

           

15. Прибор для отгонки с водяным паром (круглодонная или коническая колба на 25 мл, насадка Вюрца ГОСТ 9425-71*, холодильник Либиха ГОСТ 9499-70*, алонж ГОСТ 9425-71*, приемник - колба емкостью 10 мл. Всё на шлифах).

_______________

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действуют ГОСТ 25336-82, ГОСТ 23932-90. - Примечание изготовителя базы данных.

           

17. Центрифуга лабораторная ЦЛС-3

18. Прибор для встряхивания АВУ МРТУ 2451-64.

     

     ХОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ

          

     1. Определение формальдегида в крови

Для получения плазмы крови добавляют 0,1%-ный раствор гепарина или 5%-ный раствор цитрата натрия в 0,85% растворе NaCl.

Центрифугированием отделяют плазму.

К 2 мл полученной плазмы прибавляют 2 мл 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты для осаждения белков, центрифугируют 15 минут (число оборотов 2000 об/мин), декантируют верхний слой. К полученному раствору прибавляют 2 мл дистиллированной воды и из полученной смеси отгоняют с водяным паром 2 мл дистиллата. К отгону прибавляют 1 мл спиртового раствора димедона (концентрации 200 мкг/мл), нагревают 10 минут на кипящей водяной бане с обратным холодильником, охлаждают и экстрагируют хлороформом.

Для экстракции продукта реакции (формальдимедона) берут 2 мл хлороформа и встряхивают в делительной воронке в течение 5 минут. Экстракцию повторяют еще раз. Хлороформенные экстракты объединяют, пропускают через фильтр с безводным сульфатом натрия и упаривают в грушевидной колбе на водяной бане до объема 0,1-0,2 мл.     

     

ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЕ

Содержимое колбы после отгонки растворителя при помощи градуированной пипетки наносят на хроматографическую пластинку. Проба наносится в одну точку на середину пластинки на расстоянии 1,5 см от ее нижнего края. Нанесение проводится таким образом, чтобы диаметр полученного пятна не превышал 1 см. Справа и слева от пробы на расстоянии не менее 1 см наносят растворы "свидетелей" - стандартные растворы определяемого препарата. Пластинку с нанесенными пробами помещают в камеру для хроматографирования, в которую наливают растворитель - хлороформ. Высота слоя растворителя на дне камеры не должна превышать 0,5 см. После подъема растворителя пластинку вынимают из камеры и отмечают линию, до которой поднялся растворитель, сушат на воздухе до полного исчезновения запаха хлороформа.

Для обнаружения препарата пластинку опрыскивают 0,5% раствором йода в хлороформе.

Формальдимедон обнаруживается на пластинках в виде желтых пятен на белом фоне. Количественное определение препарата производится путем визуального сравнения размера и интенсивности окраски пятен определяемого вещества в пробе с интенсивностью и размером пятен стандартов.

Идентификацию препарата осуществляют по величине пятен, равное 0,48±0,02.

Формула для расчета:     

,

где - содержание формальдегида, мкг/мл;

- количество формальдимедона, найденное в анализируемой пробе, мкг;

- объем исследуемой пробы, мл;

9,7 - фактор пересчета от формальдимедона к формальдегиду.

     

     2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФОРМАЛЬДЕГИДА В МОЧЕ

К 0,5 мл мочи прибавляют 3,5 мл дистиллированной воды и 1 мл 5% раствора трихлоруксусной кислоты. Из полученной смеси отгоняют 2 мл с водяным паром. К отгону прибавляют 1 мл спиртового раствора димедона (концентрации 200 мкг/мл) и дальше поступают, как описано выше.